Di seguito segnalo all’attenzione e alla riflessione dei lettori di questo blog lo studio scientifico dal titolo “Unprecedented Persistence of Vaccine mRNA, Plasmid DNA, Spike Protein, and Genomic Dysregulation Over 3.5 Years Post-COVID-19 mRNA Vaccination”, pubblicato sul portale Zenodo. I ricercatori sono: Nicolas Hulscher, MPH, Vanessa Schmidt, PhD, Michael Mörz, MD, Claire Rogers, PA-C, Natalia von Ranke, PhD, Wei Zhang, PhD, John A. Catanzaro ND, PhD e Peter A. McCullough MD, MPH. Di seguito riporto l’Abstract nella traduzione da me curata.
Zenodo è un repository open access generale, gestito dal CERN di Ginevra e sviluppato in collaborazione con OpenAIRE.
Abstract
Contesto: La biodistribuzione a lungo termine e la persistenza dei componenti dei vaccini a RNA contro il COVID-19 non sono ancora state caratterizzate in modo sufficiente. Prove emergenti suggeriscono che l’espressione prolungata della proteina spike, l’RNA residuo e i frammenti di DNA plasmidico potrebbero contribuire alle sindromi multisistemiche post-vaccinazione.
Presentazione del caso: Riportiamo il caso di un uomo di 55 anni che ha ricevuto tre dosi del vaccino mRNA Pfizer-BioNTech COVID-19 e successivamente ha sviluppato una disfunzione multiorganica progressiva compatibile con la sindrome post-vaccinale COVID-19 (PCVS), che ha coinvolto i sistemi cardiopolmonare, neurologico, muscolo-scheletrico, gastrointestinale, autonomo, otorinolaringoiatrico, audiovestibolare, immunitario, oftalmico, dermatologico e psichiatrico. Le manifestazioni cliniche includevano: embolia polmonare; miocardite confermata da risonanza magnetica tardiva; deficit neurocognitivo; neuropatia delle piccole fibre; disfunzione autonomica; mialgia; coinvolgimento pancreatico e gastrointestinale cronico; peggioramento dell’acufene con perdita dell’udito neurosensoriale; disfagia vocale e disfonia; disturbi oftalmici; infiammazione dermatologica cronica; ansia/depressione. Il caso è stato valutato attraverso un’indagine clinica longitudinale e multidominio particolarmente approfondita, che ha compreso analisi molecolari, immunologiche, genetiche, proteomiche, trascrittomiche e tissutali, intraprese per caratterizzare i meccanismi della malattia ed escludere eziologie alternative.
Valutazione diagnostica: dopo oltre 40 visite al pronto soccorso e oltre 200 visite ambulatoriali specialistiche, il paziente è stato sottoposto a oltre 100 esami di laboratorio non di routine e oltre 100 studi di imaging/funzionali. Questa valutazione ha sistematicamente escluso i meccanismi eziologici sottostanti nei domini infettivo, autoimmune, reumatologico, endocrino, genetico, ematologico, maligno, tossico/correlato ai farmaci, cardiovascolare/vascolare, metabolico e neurologico primario. I test sono rimasti in gran parte non diagnostici. Dopo la diagnosi di miocardite, è stata sospettata una possibile infezione asintomatica non documentata/non diagnosticata che si manifestava come COVID lungo, e sono stati effettuati esami sierologici; i risultati inaspettati hanno portato a test immunologici e tissutali più approfonditi per i componenti derivati dal picco e dal vaccino. Gli anticorpi del nucleocapside SARS-CoV-2 sono risultati negativi in cinque momenti distinti compresi tra 809 e 1.433 giorni dopo la vaccinazione, come confermato da tre laboratori indipendenti. Il paziente rimane negativo al nucleocapside con livelli di anticorpi spike persistentemente elevati (4.553 U/mL) 1.433 giorni dopo la vaccinazione finale.
Raccolta dei campioni e metodi analitici: campioni di sangue e tessuto cutaneo sono stati prelevati in più momenti tra 852 e 1.364 giorni dopo la vaccinazione finale con Pfizer-BioNTech COVID-19 mRNA. I compartimenti biologici analizzati includevano plasma, esosomi circolanti, cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) e tessuto cutaneo. I campioni sono stati valutati in diversi laboratori indipendenti utilizzando diverse metodologie analitiche, tra cui ELISA, immunoistochimica automatizzata, RT-PCR, PCR standard con conferma mediante sequenziamento Sanger, sequenziamento dell’intero genoma, profilazione trascrittomica e spettrometria di massa quantitativa.
Risultati molecolari circolanti: A 852 giorni dalla vaccinazione, i test immunologici sul sangue hanno identificato la proteina S1 del SARS-CoV-2 rilevabile all’interno di sottogruppi di monociti classici e non classici con anomalie associate delle citochine e dei marcatori immunitari. A 1.173 giorni dalla vaccinazione, l’ELISA ad alta sensibilità ha rilevato la proteina spike libera di Wuhan nel plasma (129,0 ± 4,1 fg/mL) e negli esosomi circolanti (11,6 ± 0,1 fg/mL).
A 1.284 giorni, la RT-PCR ha identificato mRNA spike derivato dal vaccino negli esosomi circolanti, mentre l’RNA PBMC è rimasto negativo dopo l’estrazione trattata con DNasi e la PCR specifica per l’amplicone mirata a tre regioni ORF spike (S1-S3). Il profilo sierologico a 1.173 e 1.284 giorni dopo la vaccinazione ha dimostrato concentrazioni persistentemente elevate di IgG4 specifiche per spike (rispettivamente 354,4 ± 22,4 ng/mL e 320,2 ± 4,4 ng/mL), in linea con la stimolazione antigenica in corso e una risposta sbilanciata verso la tolleranza immunitaria.
Risultati molecolari e istopatologici a livello tissutale: Le biopsie cutanee seriali a 1.160, 1.249 e 1.364 giorni dopo la vaccinazione, tutte prelevate dalla cute del tronco in aree clinicamente attive della malattia di Grover, erano negative al nucleocapside e hanno dimostrato un deposito persistente di proteina spike nelle cellule endoteliali e nei macrofagi mediante immunoistochimica automatizzata con correlazione istopatologica. La proteina spike è stata trovata anche nelle fibre nervose a 1.364 giorni. La biopsia cutanea a 1.364 giorni conteneva molteplici elementi di DNA plasmidico, tra cui sequenze del gene spike (S1-S3), ori1/ori2 e l’enhancer SV40, confermando la ritenzione duratura del DNA derivato dal vaccino nel tessuto somatico mediante amplificazione PCR con elettroforesi su gel di agarosio e sequenziamento Sanger.
Analisi multi-omica: l’analisi delle varianti strutturali del sequenziamento dell’intero genoma a 1.277 giorni dalla vaccinazione ha rivelato un’instabilità genomica diffusa, con grandi duplicazioni e delezioni che interessano EGFR, MYC, ERBB2 ed ETV6/RUNX1, mentre il confronto RNA-DNA ha mostrato varianti solo RNA nei percorsi ribosomiali, NMD, small-RNA, epigenetici e TP53. Il profilo trascrittomico del sangue intero ha evidenziato stress ossidativo, attivazione vascolare e fragilità nucleare. La proteomica delle urine mediante spettrometria di massa quantitativa ha confermato l’infiammazione sistemica con iperattivazione del complemento (CFH), squilibrio redox (PRDX1) e risposte anticorpali sostenute, supportate dagli alleli di rischio HLA-B07:02 e DRB1*11:04.
Conclusione: Questo caso documenta la più lunga persistenza in vivo riportata di mRNA derivato dal vaccino, frammenti di DNA plasmidico e proteina spike dopo la vaccinazione con mRNA, con rilevamento riproducibile in più laboratori indipendenti, compartimenti biologici distinti e sistemi di rilevamento molecolare complementari che si estendono oltre 3,5 anni dopo la dose finale. La proteina spike, le sequenze di mRNA spike e gli elementi della struttura del plasmide sono stati identificati sia nelle cellule immunitarie che nel tessuto somatico, con la continua assenza della proteina nucleocapside SARS-CoV-2 o di anticorpi, escludendo efficacemente una precedente infezione come fonte. La convergenza di queste osservazioni tra i campioni di sangue e tessuti prelevati longitudinalmente fornisce una prova diretta che il materiale genetico derivato dal vaccino mRNA e i suoi prodotti proteici tradotti possono persistere in vivo per anni dopo la somministrazione. Parallelamente, analisi multi-omiche hanno rivelato una instabilità genomica sostenuta e una disregolazione trascrittomica più di 3,5 anni dopo la vaccinazione, suggerendo che il materiale persistente derivato dal vaccino possa essere associato ad alterazioni a lungo termine nei percorsi genomici e molecolari dell’ospite. Questi dati mettono in discussione le ipotesi prevalenti riguardo alla rapida degradazione e all’attività biologica di breve durata dei componenti del vaccino a mRNA e sottolineano la necessità di studi longitudinali controllati per determinare la prevalenza, i meccanismi e le conseguenze cliniche del materiale persistente derivato dal vaccino.
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